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简述pcr技巧道理及步调

2020-04-04 | 人围观

  PCR技巧,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技巧可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍,这类敏捷获得少量单一核酸片段的技巧在分子生物学研究中具有没有足轻重的意义,极大年夜地推动了生命迷信的研究停顿。

  关键词:PCRPCR聚合酶链反应

  一.锚定PCR(anchored PCR):

  引进锚定引物,可以协助克制序列未知或序列未全知的阻碍。

  在DNA3’-末尾加上poly(dG)尾,与此相对应的锚定引物poly(dC)通俗应在十二聚以上。

  

  二.不合毛病称PCR(asymmetric PCR)

  不合毛病称PCR主如果在PCR系统中设计分歧的引物浓度,两条引物浓度比为1:50或1:100,前12个轮回两条模板等量扩增,以后低浓度引物消耗殆尽,其扩增产品增加以致于无;而高浓度引物介导发生的扩增产品(即单链DNA)逐渐添加,可掉掉落少量单链DNA(ssDNA)用于直接测序。

  三.反向PCR(inverse PCR)

  

  四.多重PCR(multiplex PCR)

  多重PCR是用多对引物同时对模板DNA上的多个区域停止扩增。

  多重PCR技巧的难点不是在于其道理和操作的复杂性,而是在于其多对引物的设计,必须保证多对引物之间不构成引物二聚体,引物与目标模板区域具有高度特异性。

  应用于基因诊断,对与疾病相干的基因(宏大年夜)停止扩增检测。

  五.逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)

  由mRNA逆转录发生cDNA链作为PCR反应模板。

  逆转录分化cDNA时,引物可选用特异引物、随机六聚体引物或寡聚dT(12-18)。

  设计RT-PCR的引物时最好是分散在分歧的外显子上,以避免基因组DNA的污染招致假阳性结果

  1、试验目标

  1.控制聚合酶链式反应的道理。

  2. 控制移液枪和PCR仪的基本操作技巧。

  2、试验道理

  PCR技巧,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技巧可在试管内的经数小时反应就将特定的DNA片段扩增数百万倍,这类敏捷获得少量单一核酸片段的技巧在分子生物学研究中具有没有足轻重的意义,极大年夜地推动了生命迷信的研究停顿。它不只是DNA剖析最经常使用的技巧,而且在DNA重组与表达、基因结构剖析和功用检测中具有主要的应用价值。

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